帕唑帕尼(Pazopanib)与多西他赛协同治疗膀胱癌细胞

　　膀胱癌表达了许多潜在的生物制剂治疗靶点，包括血管内皮生长因子受体 (VEGFR)。帕唑帕尼（Pazopanib）是 VEGFR-1、-2 -3、血小板衍生生长因子受体 (PDGFR) 和 c-Kit 的小分子抑制剂。目前的研究调查了帕唑帕尼单独使用和与多西他赛联合使用对膀胱癌细胞的疗效。

　　材料和方法

　　使用人膀胱癌细胞 HTB3、HT1376、J82、RT4、CRL1749、T24、Sup 和 HTB9，使用基于四唑的测定法评估帕唑帕尼和细胞毒性化疗的治疗效果。进一步检查了这些试剂对克隆生长的组合作用。Western印迹用于评估相关下游靶标的变化，包括磷酸-AKT、磷酸-FAK、总AKT和总FAK。

　　结果

　　单药帕唑帕尼（Pazopanib）具有适度的活性。然而，在多个这些细胞系中，多西他赛和帕唑帕尼的组合出现了协同作用。由于 J82 和 T24 细胞对单药多西紫杉醇化疗具有抗性，因此选择它们进行额外的克隆形成测试。1.25 nM 的多西紫杉醇对克隆形成几乎没有影响；然而，与帕唑帕尼联用时，观察到集落形成的显着抑制。这种联合治疗还降低了磷酸化 AKT，这是所有细胞系中细胞存活的重要介质，而磷酸化 FAK 表达受到不同程度的影响。

　　本研究证明了帕唑帕尼（Pazopanib）与多西他赛在多西他赛耐药膀胱癌细胞中的协同作用。这项工作支持未来评估帕唑帕尼与多西紫杉醇治疗膀胱癌的疗效和毒性潜力。

　　这些研究确立了帕唑帕尼（Pazopanib）联合细胞毒性化疗治疗膀胱癌的临床前基本原理。虽然帕唑帕尼在这些体外实验中具有适度的单药活性，但当帕唑帕尼与多西他赛联合使用时，观察到了协同活性。这种组合也显着减少了克隆形成集落的形成。

　　血管生成在恶性疾病的生长和转移扩散中起关键作用。VEGF是一种关键的血管生成因子，其作用由VEGFR介导。抑制 VEGFR 不仅抑制血管生成，而且抑制肿瘤细胞生长。Podar 等人报道，帕唑帕尼抑制体外骨髓瘤细胞的生长、存活和迁移，抑制 VEGF 诱导的内皮细胞和肿瘤细胞上粘附分子的上调。帕唑帕尼最近被批准用于晚期 RCC 。在晚期 RCC 患者的 III 期试验中，与安慰剂相比，帕唑帕尼的中位无进展生存期（9.2 个月对 4.2 个月）有显着改善，客观缓解率为 30%。正在进行的临床试验检查其作为单一药物在晚期尿路上皮癌中的应用。

　　晚期尿路上皮癌化疗不敏感的机制很复杂，尚未完全了解。Xia 等利用 VEGF 反义寡核苷酸抑制 VEGF 的活性来研究其在化疗致敏中的作用。这项工作表明，VEGF 抑制增强了多西紫杉醇在膀胱癌小鼠异种移植模型中的作用，显着抑制增殖指数和微血管密度，并诱导细胞凋亡。与这种反义方法相反，帕唑帕尼目前正在临床使用，正在进行的尿路上皮癌试验。卡马特等研究了多西紫杉醇和 AEE788 的联合疗法，AEE788 是一种双重表皮生长因子受体 (EGFR) 和 VEGFR 抑制剂。这种组合对多西他赛耐药的卵巢癌细胞有效。在本研究中，帕唑帕尼联合多西他赛在多西他赛耐药细胞中显示出协同作用。通过使用 J82 和 T24 细胞的克隆形成试验证实了这些组合的效果。此外，必须强调的是，这些实验研究了帕唑帕尼联合细胞毒性化疗对膀胱癌细胞的直接影响。然而，帕唑帕尼的抗血管生成作用并未在体外环境中实现，进一步的功效可能在动物模型中得到证实，其中体内血管生成也会受到影响。

　　与 VEGF 的细胞作用有关的信号分子包括磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)、AKT 和内皮一氧化氮合酶。AKT 通过磷酸化癌细胞中的大量底物来调节生长和存活机制。大量研究集中在阻断磷酸肌醇 3-激酶/AKT 存活信号通路以寻求改进的癌症治疗方法。AKT 活性的操纵已被证明可以调节肿瘤细胞对化疗的反应。班纳吉等人证实多西紫杉醇可以诱导生长抑制并降低前列腺癌细胞中磷酸化AKT的水平。多西紫杉醇还可以降低人脐静脉内皮细胞中的 AKT 磷酸化。帕唑帕尼可以阻断 VEGF 触发的磷酸化 AKT 激活。本研究发现，多西他赛降低了磷酸化AKT的表达，并且在两种多西他赛耐药细胞系中加入帕唑帕尼后，这种作用大大增强。当与帕唑帕尼联合使用时，多西他赛进一步降低了 T24 细胞中磷酸化 AKT 的表达。磷酸化-AKT对细胞存活很重要，这些结果支持磷酸化-AKT抑制在帕唑帕尼和多西他赛组合在膀胱癌细胞中的抗癌功效中的重要性。

　　VEGF 也被证明对焦点细胞粘附的信号成分有多重影响，例如 FAK ，它在几种晚期癌症类型中表达。FAK 在细胞骨架网络的动态重组和细胞迁移中起着关键作用，FAK 下游的几种途径能够促进细胞存活。帕唑帕尼和多西紫杉醇的组合对磷酸化 FAK 有不同的影响，在两种细胞系中都有显着的抑制作用。FAK 在帕唑帕尼和多西他赛在膀胱癌细胞中的协同作用中的作用（如果有的话）尚不清楚。

　　结论

　　尽管生物制剂有多种潜在靶点，但目前临床上没有用于治疗膀胱癌的“新一代”疗法。本研究证明了帕唑帕尼（Pazopanib）与多西他赛在多西他赛耐药膀胱癌细胞中的协同作用。帕唑帕尼是一种临床相关且易于使用的药物，目前正在进行晚期尿路上皮癌患者的帕唑帕尼单药人体试验。这项工作支持未来评估帕唑帕尼与多西紫杉醇治疗膀胱癌的疗效和毒性的潜力。

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