依维莫司(everolimus)抑制乳腺癌细胞的旁分泌前破骨细胞活性

　　乳腺癌 (BC) 细胞分泌可溶性因子，加速破骨细胞 (OC) 分化，导致溶骨性骨转移的形成。在 BOLERO-2 试验中，除了对癌细胞的一般抑制作用外，接受依维莫司治疗的骨受累 BC 患者骨骼中的肿瘤进展延迟，这是通过抑制 mTOR 直接抑制 OC 的结果。在这里，我们探索了依维莫司（everolimus）作为 mTOR 抑制剂对 BC 细胞的 pro-OC 旁分泌活性的影响。

　　方法

　　MDA-MB-231 和 MCF-7 BC 细胞系均与亚致死量的依维莫司一起孵育，并评估它们的条件上清液区分 OCs 与 PBMC 与健康供体的能力，以及干扰其骨吸收的能力磷酸钙切片上显示的活性。我们还通过 ELISA 测量了依维莫司处理的 BC 细胞中主要 pro-OC 因子的 mRNA 水平及其分泌水平，并通过免疫印迹评估了与 mTOR 抑制合作的通路所登记的转录因子的磷酸化。最后，在胫骨内注射后，在 SCID 小鼠中评估了这些细胞的体内pro-OC 活性。

　　结果

　　我们发现依维莫司（everolimus）显着抑制 OC 的分化及其体外骨吸收活性，还发现 mRNA 和分泌的 pro-OC 因子如 M-CSF、IL-6 和 IL-1β 均降低，其 ELISA 较低水平与 NFkB 通路效应物的缺陷磷酸化平行。此外，当胫骨内注射 SCID 小鼠时，依维莫司处理的 BC 细胞比未处理的细胞产生更小的骨转移。

　　结论

　　BC 细胞中的 mTOR 抑制通过干扰 NFkB 途径导致其旁分泌 pro-OC 活性受到抑制；这种效应也可能是 BOLERO-2 试验中观察到的骨转移性疾病进展延迟的原因。

　　内分泌治疗是晚期 HR+BC患者的标准治疗。然而，在最初的反应之后，大多数患者会出现内分泌抵抗。潜在的分子机制是 PI3K/Akt/mTOR 过度活跃，它通过 p70S6K 驱动雌激素受体 (ER) 的磷酸化，导致不依赖配体的 ER 转录活性。mTOR 参与内分泌抗性 BC 细胞的细胞生长也得到了来自不同生长因子受体通路的信号汇合的支持，例如表皮生长因子受体 (EGFR)、胰岛素生长因子受体 (IGF-1R) 和胰岛素受体 (InsR)，对 PI3K/Akt/mTOR。此外，除了在依维莫司（everolimus）治疗的内分泌耐药 BC 患者中通过 mTOR 抑制获得无进展生存期的预期改善外，BOLERO-2 试验的结果表明，该药物显着延迟骨骼疾病进展，在转移性 BC 患者。

　　骨转移发生在 BC 中，是该肿瘤向骨性的作用，导致 OC 过度活跃以产生典型的溶骨性病变。虽然怀疑 BC 细胞本身会降解骨基质，但它们的旁分泌 pro-OC 活性是驱动过度 OC 分化和过度活化的主要致病事件，导致骨转移的形成 [39,40]。因此，我们研究了依维莫司是否作为 BC 细胞旁分泌 pro-OC 活性的负调节剂。

　　在 BOLERO-2 研究中，依维莫司（everolimus）对骨骼健康的有益影响也被解释为抑制 OC 中 mTOR 活性的结果。已经在转基因小鼠中证明，携带人TNFα类似于类风湿性关节炎模型，mTOR 信号驱动 OC 功能，并且该途径的抑制可以减轻骨侵蚀 [41]。在这些动物中，依维莫司或西罗莫司对 mTOR 的抑制导致关节结构损伤显着减少。微信扫描下方二维码了解更多：