索非布韦治疗对NK细胞的影响

　　慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染的特征在于自然杀伤（NK）细胞反应失调。NK在获得对基于干扰素（IFN）-α的治疗的持续反应中起关键作用。现在，通过直接作用抗病毒药（DAA）可以实现快速持续的HCV-RNA清除。对接受第一波DAA的患者的研究表明，NK功能可以恢复。在这里，我们调查了索非布韦治疗对NK的影响。我们收集了接受雷迪帕韦/索非布韦治疗的男性HCV基因型1感染患者的前瞻性队列（n = 22）。

　　在治疗开始，治疗的第2周（W2），W4，W8和W12以及治疗后12周时获得外周血。流式细胞仪用于表征NK对治疗的反应。平均基线病毒载量为175万IU / mL。所有受试者迅速清除病毒并保持HCV RNA阴性后处理。总NK水平未见变化；但是，未成熟NK的频率（分化簇[CD] 56（Wright）降低了W2，并在整个研究过程中保持不变。W2 / W4表现出明显的表型变化，同时病毒清除迅速。

　　在第2周，T细胞免疫球蛋白和含粘蛋白域的3和CD161显着增加，到第12周恢复到治疗前水平。直到晚期（W12或后处理）才有明显的变化。在第12周和持续治疗后，观察到几种活化标记的下调，包括NKp30和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体。与预处理相比，在处理后NK敏感细胞系K562的IFN-γ产生或细胞因子介导的杀伤作用上没有观察到差异。

　　结论：我们的表型数据表明短暂激活，然后将NK细胞活性抑制到预处理水平。在同质患者队列中，对雷迪帕韦/索非布韦的NK反应并不普遍。需要更多的研究来阐明NK细胞在无IFN方案中的作用，这将对保护免受再感染和纤维化进程产生影响。

　　改变的NK细胞亚群分布以及激活标记的表达和功能是慢性HCV感染的标志。在本研究中，我们评估了使用雷迪帕韦索非布韦（目前为HCV的主流治疗方法）治疗的全男性HCV基因型1感染受试者的相当同质队列中外周NK细胞的水平，表型和功能。我们的研究旨在评估高度成功的DAA治疗对NK细胞的影响。为了实现这一目标，我们使用每个受试者的基线预处理NK细胞特征作为我们的参考对照。

　　我们收集了一个预期的HCV基因型1型男性患者队列，并根据美国肝病研究协会-美国传染病学会指南用雷迪帕韦/索非布韦治疗了8/12周（n = 22）。该研究招募的受试者中除2个以外的绝大多数都是男性患者。因此，我们决定仅使用男性个体进行分析，以消除可能的性别偏见。该研究方案已由科罗拉多大学丹佛分校的机构审查委员会和丹佛退伍军人事务医疗中心批准。

　　总的来说，我们的表型数据表明，在治疗后，以雷迪帕韦/索非布韦开始早期（W2）瞬时激活NK细胞，然后在停止治疗后12周将NK细胞活性降至低于预处理水平。因此，我们评估了在早期时间点（W2）NK细胞的功能，该时间与病毒的快速下降相吻合，并且在治疗结束后的第12周（当病毒没有循环很长时间时）。

　　在早期时间点，对IL-12和IL-18的刺激反应对IFN-γ的产生没有影响。即使在治疗结束后的第12周，也没有恢复IFN-γ反应的证据（数据未显示）。NK细胞也是趋化因子的重要生产者，以及几种血清细胞因子，包括IFN诱导蛋白10（趋化因子[C-X-C基序]配体10）和巨噬细胞炎性蛋白-1β（MIP-1β；趋化因子[C-C基序]配体4 [CCL4]）。

　　DAA治疗成功后，HCV失调。因此我们询问是否趋化因子产生由NK细胞通过ledipasvir /索非布韦治疗改变。在治疗过程中，大多数测试的趋化因子没有明显改变。在治疗的第2周和治疗后12周，有MIP-3α（CCL20）产生减少的趋势。MIP-1α（CCL3）的产生，涉及多形核白细胞的募集和激活，35在治疗的第2周略有增加，并在治疗后达到显着水平。

　　我们还在检查IFN-γ和趋化因子产生的同一时间点评估了NK细胞的细胞毒性功能。在治疗过程中，对NK敏感细胞系K562的天然细胞毒性没有改变。与治疗前相比，有50％的受试者表现出好转，而另外50％的受试者表现出IL-2和IL-15介导的K562杀伤率不变或降低。IFN-γ的产生与细胞毒性活性之间没有正相关或负相关。

　　在本研究中，所有受试者对DAA疗法均具有快速反应，在治疗后2或4周无病毒血症，治疗后12周HCV RNA阴性。在NK细胞群体中，随着病毒从血清中迅速消失，出现了一些变化。多个小组报告，慢性HCV中CD56明亮未成熟NK的比例在W2时降低，并在整个研究期间一直维持在较低水平。

　　同时，CD56变暗与治疗前水平相比，效应NK细胞在治疗后第2和第4周增加并显示出活化标记物Tim-3和CD161的更高表达。相反，在此早期时间点，激活标记CD69减少了。抑制和激活的其他几种NK细胞受体均未改变。综上所述，这些数据表明效应剂NK细胞的早期活化并支持NK细胞在DAA治疗期间清除HCV的潜在作用，这是一线DAA治疗方案所建议的。

　　清除病毒后，由于潜在的肝脏疾病的存在，慢性炎症信号的减弱及其对免疫细胞的影响可能会滞后，并且可能无法恢复到正常的健康水平。我们观察到的晚期（主要是治疗结束后的12周）NK表型的变化，包括激活（CD69，CD161）和细胞毒性（NKp30，NKp46和TRAIL）受体的表达降低，表明慢性激活的NK表型具有特征性雷迪帕韦/索非布韦疗法可逆转慢性丙型肝炎的发病率，但激活状态的正常化需要病毒消失后几周。

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