用卡马替尼(INC280)靶向cMET会损害肿瘤生长

　　cMET 受体的表达和激活与人类胰腺癌的肿瘤进展和对化疗的抗性有关。在这方面，我们评估了靶向 cMET在体外和体内胰腺癌模型中的作用。人（L3.6pl、BxP3、HPAF-II、MiaPaCa2）和鼠（Panc02）胰腺癌细胞系、内皮细胞（EC）和血管平滑肌细胞（VSMC）用于实验。此外，使用了对吉西他滨具有获得性抗性的人胰腺癌细胞系MiaPaCa2(MiaPaCa2(G250))。为了靶向 cMET 受体，使用了口服的 ATP 竞争性抑制剂卡马替尼（INC280）。通过生长试验、蛋白质印迹、运动试验和 ELISA 确定 cMET 抑制对癌症和基质细胞的影响。此外，原位异种和同基因小鼠（BALB-C nu/nu；C57BL/6）模型用于评估单独靶向 cMET 和与吉西他滨联合靶向 cMET的体内功效。

　　结果

　　用卡马替尼（INC280）治疗会损害胰腺癌细胞和 ECs 中信号中间体的激活，特别是当细胞受到肝细胞生长因子 (HGF) 刺激时。此外，在用卡马替尼（INC280）治疗后，癌细胞和 EC 响应 HGF 的运动性降低。仅检测到对 VSMC 的轻微影响。有趣的是，MiaPaCa2(G250) 显示 cMET 表达增加，并且 cMET 抑制消除了 HGF 对生长、运动和信号传导的影响，以及体外 DFX 缺氧 HIF-1α 和 MDR-1 表达。在体内，单独使用卡马替尼（INC280）治疗可抑制异种和同基因模型中的原位肿瘤生长。类似于体外结果，用吉西他滨治疗后cMET表达增加，并且cMET抑制剂与吉西他滨的组合提高了原位同源模型中的抗肿瘤能力。免疫组织化学分析显示显着抑制肿瘤细胞增殖 (Ki67) 和肿瘤血管化 (CD31)。最后，即使在疾病晚期开始使用 cMET 抑制剂治疗时，吉西他滨与卡马替尼的组合也显着延长了原位同基因肿瘤模型的生存期。

　　结论

　　这些数据提供的证据表明，靶向 cMET 联合吉西他滨可能对人类胰腺癌有效，值得进一步临床评估。

　　胰腺癌仍然是人类最具破坏性的肿瘤实体之一，手术切除是唯一的治疗选择。然而，大多数患者处于不能进行手术的阶段。因此，迫切需要新的治疗机会来改善预后。在目前的研究中，我们通过在胰腺癌模型中使用一种新型的口服 ATP 竞争性抑制剂来评估靶向 cMET 的效果。我们的结果表明，cMET 抑制会损害人类和鼠胰腺癌细胞系中 HGF 诱导的致癌信号传导中间体的激活。此外，用 cMET 抑制剂治疗可减少体内肿瘤生长当与吉西他滨联合使用时，最有效地延长小鼠的存活时间。总之，我们的结果表明靶向 cMET 可能是改善胰腺癌患者预后的一种新方法。

　　cMET 和 HGF 在外分泌胰腺中的低水平表达是已知的。然而，当进行 PanIN 甚至浸润性导管腺癌时，cMET 和 HGF 的表达都大大增加。几项研究已将 cMET 信号通路的激活与胰腺癌模型中细胞内信号通路（如 PI3K/Akt、MAPK/ERK 或 FAK）的磷酸化联系起来，从而导致肿瘤细胞的侵袭性、运动性和对吉西他滨治疗的耐药性。在目前的研究中，我们证实用 cMET 抑制剂卡马替尼（INC280）治疗癌细胞系显着损害 HGF 诱导的肿瘤细胞生长和运动，至少部分通过抑制 Akt、ERK 和 FAK 磷酸化。值得注意的是，在组成性条件下，没有检测到对癌细胞系中的生长、运动和信号中间体的影响。这一点特别重要，因为已知基质是 HGF 和 Ide等人的主要来源。表明胰腺癌标本间质中的 HGF 表达与这些患者的不良预后相关。因此，胰腺癌细胞中致癌信号级联的磷酸化通过 cMET 受体的旁分泌激活可能有助于胰腺癌的侵袭性。因此，用卡马替尼（INC280）靶向 cMET 会否定这种机制似乎是合乎逻辑的。

　　临床情况表明，大多数患者处于疾病的晚期，因此需要使用能够解决这种情况的模型。我们对使用 cMET 抑制剂的策略特别乐观，因为我们发现用吉西他滨治疗的小鼠肿瘤强烈上调 cMET 受体。为了模拟临床情况，我们选择在同基因原位生存模型的晚期肿瘤阶段应用 INC280。重要的是，在进行性肿瘤生长阶段添加 cMET 抑制剂，连同吉西他滨治疗，显着延长了小鼠的生存期。与在肿瘤植入 5 天后同时开始使用抑制剂和吉西他滨治疗的 Avan 及其同事相比，我们选择了更晚的时间点开始卡马替尼（INC280）治疗（肿瘤细胞接种后 20 天），并在 10 天更早开始使用吉西他滨。由于吉西他滨仍然是“一线”治疗，而其他治疗通常是在肿瘤出现耐药后才考虑的，我们觉得我们使用的实验模型更接近临床情况。

　　总之，本研究表明靶向 cMET 可以有效抑制胰腺癌中的肿瘤生长，即使在晚期肿瘤阶段也是如此。特别是，通过 cMET 抑制剂卡马替尼（INC280）抑制肿瘤细胞中的吉西他滨耐药性可能会改善目前用于治疗胰腺癌患者的抗肿瘤治疗策略。

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