帕博西尼(Palbociclib)在软骨肉瘤中的治疗作用

　　软骨肉瘤是一种骨的恶性软骨肿瘤，对放射疗法和化学疗法有抵抗力。细胞周期蛋白依赖性激酶 4 (CKD4) 在人类癌症中高度表达，而 CDK4 抑制剂帕博西尼（Palbociclib）已在 FDA 批准用于癌症治疗药物的临床应用。然而，CDK4 的水平和软骨肉瘤的治疗可能性需要进一步探索。因此，我们旨在研究 CDK4 的水平和帕博西尼在软骨肉瘤中的伴随治疗效果。

　　方法

　　我们使用免疫组织化学分析来评估软骨肉瘤组织中人类 CDK4 的产生。通过MTT、伤口愈合、transwell和流式细胞术测定siRNA或帕博西尼对CDK4的抑制表达对软骨肉瘤的细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡和周期阻滞的抑制作用。CDK4/Rb 信号通路通过蛋白质印迹和免疫荧光法测定。帕博西尼（Palbociclib）对骨内肿瘤生长的抑制作用通过体内生物发光成像确定。

　　结果

　　发现 CDK4 在人类软骨肉瘤样本中显着表达。CDK4水平升高与软骨肉瘤患者的恶性转移和不良预后相关。CDK4 在人软骨肉瘤细胞系中也高度表达，它被特定的 siRNA 和帕博西尼（Palbociclib）抑制导致细胞增殖减少，伴随着 Rb 的磷酸化。此外，palbociclib 还通过 CDK4/Rb 信号通路诱导 G1 期细胞周期停滞并减少细胞迁移和侵袭。帕博西尼（Palbociclib）体内给药可以减少软骨肉瘤的肿瘤负荷。

　　结论

　　总之，这些数据突出了 CDK4 抑制剂，如帕博西尼（Palbociclib），作为治疗人类软骨肉瘤的潜在有希望的疗法。

　　在骨和软组织肉瘤中，如骨肉瘤、脂肪肉瘤、横纹肌肉瘤和脊索瘤，CDK4 的扩增与不良预后相关。在软骨肉瘤中，既往研究报道 CDK4 的表达与患者样本和细胞系中的高级别软骨肉瘤有关，这表明在软骨肉瘤的发病机制和治疗中具有重要作用。与这些发现一致，在我们的研究中，在大多数测试组织样本中观察到 CDK4 表达。进一步研究软骨肉瘤的临床病理特征与CDK4表达之间的关系表明CDK4表达与软骨肉瘤患者临床治疗预后之间存在潜在的相关性。

　　先前对横纹肌肉瘤的研究表明，CDK4 对肉瘤细胞的存活和生长至关重要，其中 CDK4 的敲低导致横纹肌肉瘤的增殖停止。在软骨肉瘤中，先前的研究表明 shRNA 介导的 CDK4 表达下调导致 OUMS27、SW1353 和 CH2879 细胞系中细胞活力和生长的显着减弱。与这些发现一致，我们还在所有研究的软骨肉瘤细胞系（CS-1 和 SW1353）中显示 CDK4 的阳性染色，通过免疫荧光染色表明 CDK4 的细胞核位置。通过使用 siRNA 特异性敲低 CDK4 表达，软骨肉瘤细胞生长和 Rb 磷酸化均受到抑制。我们还注意到 CDK4 siRNA 转染可以显着消除 CS-1 和 SW1353 细胞中下游 Rb 分子的磷酸化水平。

　　帕博西尼（Palbociclib）靶向 CDK4 的 ATP 结合位点，是第一个获得临床批准的抗肿瘤 CDK4 抑制剂。最近，它被研究作为骨和软组织肉瘤的靶向治疗，如骨肉瘤、脊索瘤、滑膜肉瘤，因为它可用于（预）临床使用。在我们的研究中，在培养系统中添加 palbociclib 会抑制细胞增殖并降低 pRb 的表达。由于帕博西尼（Palbociclib）的处理通常有助于抑制 CDK4 活性而不是表达水平，我们使用蛋白质印迹分析显示帕博西尼（Palbociclib）未能影响 CDK4 的水平，同时显着降低 pRb 表达。总的来说，我们表明 CDK4 表达的减弱可以以 CDK4/Rb 依赖性方式抑制软骨肉瘤细胞增殖。

　　此前，对 CDK4 的研究报道，CDK4 主要通过细胞周期进程中从 G1 到 S 阶段的强化过渡发挥其功能作用。因此，我们检查了细胞周期和细胞凋亡，以探索 CDK4 消除后软骨肉瘤细胞增殖停滞的可能调节机制。结果表明软骨肉瘤细胞在CDK4消失后的G1期受到抑制，CDK4抑制有效地促进了显着的细胞凋亡。因此，表明帕博西尼治疗对 CDK4 的抑制通过 G1 细胞周期阻滞增强促进细胞凋亡来减轻软骨肉瘤细胞的存活和增殖。帕博西尼（Palbociclib）可能是治疗软骨肉瘤的有希望的候选药物。微信扫描下方二维码了解更多：