尼达尼布抑制体外MPM生长

　　尼达尼布靶向的受体酪氨酸激酶在MPM细胞中共表达。

　　尼达尼布的关键分子靶点的转录水平在20个MPM细胞系中被测定，作为对照，在Met5a永生化间皮细胞系和三种初级间皮细胞培养中被测定。PDGFRA、VEGFR1-3、FGFR2和FGFR3仅在部分细胞系中表达，且表达水平相对较低，而PDGFRB和FGFR1mrna可以在每个肿瘤细胞系和大多数非恶性对照细胞系中检测到，尽管表达水平不同。

　　重要的是，所有MPM细胞系都对PDGFRB和FGFR1呈双阳性。此外，与对照间皮细胞相比，MPM细胞中的FGFR1表达升高。值得注意的是，这些数据都与尼达尼布敏感性无关。根据MPM细胞的组织学亚型。这两种RTKs和其他靶受体(数据未显示)都没有表现出组织型特异性表达谱。而肉瘤样和双相MPM细胞表现出相似的表达模式，上皮样细胞则表现出更多的异质性。

　　尼达尼布抑制体外MPM生长。

　　将不同浓度的尼达尼布暴露于间皮细胞和MPM细胞72小时。用SRB法测定细胞活力，绘制剂量-响应曲线，确定各细胞系的IC50值。Met5a和NP3对照细胞系的IC50值分别为1.1和4.1mol/L。MPM细胞对IC50在1.6~5.9mol/L范围内表现出广泛的敏感性，与组织学亚型无关或靶RTKs的mRNA表达谱(数据未显示)。在长期生长试验中，用尼达尼布处理MPM细胞10天，尼达尼布能够在低得多的浓度下有效抑制克隆生成。

　　由于尼达尼布靶向的RTKs被证明可以干扰其他恶性肿瘤的化疗(27-29)，我们接下来分析尼达尼布是否对两种不同的人MPM细胞系p31和SPC111的化疗敏感性有影响。SPC111细胞对尼达尼布的抗性强于p31细胞(IC50s分别为5.9和1.9mol/L)。就对顺铂的敏感性而言，p31比SPC111更耐药(IC50s分别为4.3和0.7mol/L)。两种细胞系中的FGFR1表达水平相似，而p31细胞中的PDGFRB转录本水平较高。尼达尼布的另一个靶点RTKs在两种细胞系的mRNA水平上均未检测到。

　　值得注意的是，在一定浓度下，我们观察到尼达尼布和已建立的化疗药物(顺铂)在两种细胞系中的叠加效应。然而，在p31和SPC111细胞中，尼达尼布和顺铂之间没有明显的协同作用，而且，在20个人类MPM细胞系中，顺铂和尼达尼布敏感性之间没有相关性。

　　尼达尼布体外对MPM细胞增殖、迁移和凋亡及其下游靶受体信号转导的影响。

　　采用五种MPM细胞系进行BrdUrd掺入实验，研究尼达尼布对肿瘤细胞增殖的影响。该药物在各MPM细胞系中均表现出显著的抗增殖作用，且呈剂量依赖性。

　　为了研究细胞凋亡的诱导，我们进行了TUNEL分析，以检测细胞凋亡过程中的DNA片段。尼达尼布治疗后细胞凋亡率明显升高，仅在SPC212和VMC40细胞中被证实。

　　为了研究尼达尼布的抗氧化活性，我们使用了五种对该药物敏感性不同的人MPM细胞系。尼达尼布处理(1或3mol/L)能显著降低各细胞系的迁移活性。

　　我们进行了尼达尼布对Erk、Akt和S6磷酸化作用的时程实验，以研究该药物抗肿瘤作用背后的分子机制。MPM细胞暴露于0.5mol/L尼达尼布的时间从5分钟到24小时不等。通过Westernblot检测上述蛋白的活化情况。Erk1/2的磷酸化在每个细胞系中早20分钟就被有效阻断。可能是由于细胞密度和生长因子浓度的变化，在24小时的孵育过程中，溶剂对照组的Erk激活也下降了。然而，在p31和VMC40细胞中，Erk磷酸化的抑制是明显的，即使在这之后的时间点。

　　在SPC111和M38K细胞中，抑制作用较弱，而在SPC212细胞中无抑制作用。Akt磷酸化在p31、SPC212、M38K和VMC40细胞中均有抑制作用，但在后两种细胞系中仅在较晚的时间点(24小时)有抑制作用。尼达尼布(0.5mol/L)对SPC111细胞中Akt的激活没有影响，而SPC111细胞是整个研究小组中耐尼达尼布的细胞系。该药物对S6磷酸化的影响可以忽略不计。

　　尼达尼布抑制人MPM在体内的生长，延长小鼠的生存负载原位人MPM异种移植。

　　为了检验尼达尼布的体内有效性，我们使用了原位MPM模型，将人p31或SPC111MPM细胞注射到SCID小鼠的胸腔。

　　在第一组实验中，从p31细胞接种后第21天开始，通过PO或IP给药50mg/kg尼达尼布。根据我们的初步实验(数据未显示)，到目前为止，在小鼠的胸膜上已经可以看到几个肿瘤结节。p31细胞高表达PDGFRB和FGFR1受体，它们对尼达尼布相对敏感，但对顺铂不敏感。尼达尼布耐受性良好，在治疗期间无任何毒性迹象。经PO处理的动物存活率呈良好趋势，但无显著益处(P=0.059vs.PO对照)。然而，尼达尼布在给予IP时显著延长了小鼠的生存时间(P=0.0008)。

　　重要的是，尼达尼布IP也显著抑制了动物的相对体重减轻(P=0.0337)，因为实验结束时整体情况较好。我们对这些数据的解释是，尼达尼布IP不仅延长了正位生长的人类MPM肿瘤小鼠的生存，而且还干扰了MPM诱导的恶病质。为了进一步证实尼达尼布的抗肿瘤作用，体内的MPM生长也通过磁共振成像检查。虽然对照组动物在植入肿瘤后的第25天胸内肿瘤负担明显，但接受尼达尼布治疗的动物肿瘤肿块明显减少。

　　在第二组原位MPM异种移植实验，增加尼达尼布标准化疗被植入了两个不同的人类MPM细胞系，奔跑和SPC111。尼达尼布管理IP，在上述的体内实验中，这条路线的政府比阿宝被证明是更有效的治疗。与未治疗的对照组相比，我们可以证明在两种细胞模型中，单独使用顺铂/培美曲塞化疗或单独使用尼达尼布的小鼠的肿瘤负荷显著降低。与未治疗的对照肿瘤相比，联合化疗和抗血管生成方案(包括尼达尼布或贝伐珠单抗)在两种细胞模型中也显示出显著的体内肿瘤生长抑制潜力。

　　在第二组体内实验中，另一个关键的观察是，在标准化疗中加入尼达尼布比单独化疗产生明显更高的反应。这些反应与贝伐珠单抗联合化疗的结果相似(P31肿瘤)或更好(SPC111肿瘤)。这里还需要提到的是，尼达尼布与单独的贝伐珠单抗不同，在VEGF-A基线水平较高的p31肿瘤中，尼达尼布单独被证明是比标准化疗更有效的体内MPM生长抑制剂。

　　尼达尼布能有效地在不依赖基线VEGF-A表达的情况下，在正位生长的人类MPM异种移植中阻断血管生成。

　　使用CD31作为内皮标志物的形态学分析显示，与未治疗的低基线VEGF-ASPC111肿瘤相比，基线VEGF-A高表达的对照组p31肿瘤微血管面积(MVAs)明显增加(分别为2.7%±1.2%和1.2%±0.8%)；P=0.067)。与尼达尼布有效的体内MPM生长抑制作用一致，在两种细胞模型中，尼达尼布治疗(单独或联合化疗)肿瘤的MVAs显著降低(与对照组相比)。

　　但有趣的是，我们没有观察到使用贝伐珠单抗或不使用化疗的p31或SPC111肿瘤MVAs的显著降低。在两种细胞模型中，尼达尼布的抗血管毒作用伴随着肿瘤内坏死的增加。这在联合尼达尼布/化疗组中明显。尼达尼布作为单一药物显著增加MPM细胞凋亡(P=0.0317；与控制)和p31肿瘤增殖下降(P=0.0341vs.对照组)。尼达尼布一盒多少钱？有需要的患者可以咨询康安途海外医疗。详情请扫码咨询：