尼达尼布在体外抑制Pca细胞增殖
选择LNCaP、PC3、22RV1、DU145等不同的Pca细胞株进行实验。数据显示,尼达尼布在不同细胞系中的IC50值在0.87和2.54之间变化。然后用3个不同浓度的尼达尼布对Pca细胞进行处理,体外活性检测显示尼达尼布抑制了细胞的增殖,表明尼达尼布能够抑制这些细胞的增殖。尼达尼布的抗肿瘤作用可能与其选择性抗泛受体TKI活性有关。
尼达尼布已经被认为是TKs的抑制剂,通过结合激酶结构域的N-端和c-端裂口的atp结合位点。在药理水平上,尼达尼布可以抑制TKs,包括所有3种VEGFR亚型(IC50,13-34nmol/l),PDGFR的inhibitor和PDGFR的inhibitor(IC50,59和65nmol/l),以及FGFR的1、2和3型(IC50,69,37和108nmol/l)。使用3种不同剂量的尼达尼布治疗后,未观察到前列腺癌细胞的明显死亡。相反,在治疗后的2天内,细胞保持了增殖,在细胞增殖中止之前。与增殖实验结果一致的是,尼达尼布处理抑制了PI3K下游蛋白的表达,包括CDC42、phospho-Akt和phospho-ERK1/2。尼达尼布治疗也降低了CyclinD1的表达。
内聚体的激活介导对尼达尼布的获得性抵抗
为了明确Pca对尼达尼布获得性耐药的潜在机制,本研究通过将细胞暴露于3种不同的尼达尼布,建立了具有获得性耐药的不同细胞系。尼达尼布处理后4周,所有Pca细胞均表现出对尼达尼布的显著抗性。免疫印迹显示,与未进行处理的细胞相比,在检测的所有细胞系中,catenin表达均显著增加;这与连环蛋白是一种有助于细胞粘附连接的分子有关。
耐尼达尼布细胞在显微镜下观察,呈现细胞内现象形态,即一个或多个活细胞存在于其他细胞内,或多个细胞被依次吞噬。这些与其他研究中发现的内托结构相似。值得注意的是,吞噬细胞在形态上转变为类吞噬细胞,具有伪足和多极形态。荧光显微镜下观察到RhoA在耐nintedanb的Pca细胞中阳性表达,这是内嵌的标志。此外,尼达尼布处理的Pca细胞的细胞大小和细胞核明显增大。
综上所述,这些结果表明,用尼达尼布治疗Pca细胞可能导致内嵌。因此,在随后的实验中,我们只选择雄激素受体阳性的22RV1和雄激素受体阴性的DU145两株Pca细胞系来进一步研究尼达尼布诱导内切的机制。
尼达尼布处理后Pca细胞Rho/ROCK和E-cadherin升高
我们已经确定,内切由RhoA/ROCK1/2信号通路和E-cadherin调控。因此,我们分析了Pca细胞中RhoA和ROCK1/2的表达情况,发现尼达尼布处理22RV1和DU145细胞后,RhoA、ROCK1和ROCK2的表达增加。本研究还评估了尼达尼布治疗后E-cadherin在Pca细胞中的表达。结果显示,E-cadherin的表达也明显增加。由于E-cadherin是另一种内嵌现象的生物标志物,同时E-cadherin水平升高。虽然PC3是一种PTEN深度缺失和Akt活化的Pca细胞系,但尼达尼布处理PC3细胞后,仍然增加了ROCK1/2和E-cadherin的表达。
尼达尼布在Pca细胞中抑制FGFR,并抑制其下游通路的激活,包括PI3K。结果表明,尼达尼布抑制22RV1和DU145细胞中CDC42、Akt和ERK1/2的表达(PI3K下游)。此外,PI3K抑制剂buparlisib处理细胞时,CDC42被抑制。然而,Akt或ERK1/2受到抑制的细胞既没有发生内切,也没有表现出ROCK1/2或E-cadherin表达的增加。因此,我们推测尼达尼布可通过CDC42途径诱导内切。
因此,Pca与CDC42抑制剂细胞治疗,并观察entosis形态开发治疗2周后连同ROCK1/2和钙粘蛋白表达增加。此外,增加ROCK1/2CDC42-knockdown和钙粘蛋白表达也观察到细胞。随后CDC42通过转染细胞过表达在Pca。结果表明,过表达CDC42时,ROCK1/2的表达下降,在使用ROCK1/2抑制剂Y-27632处理的细胞中也可以观察到这一现象。过表达CDC42的细胞中E-cadherin的表达也降低了。此外,与对照组相比,过表达CDC42的细胞中尼达尼布相关的内积被显著抑制(P<0.05)。因此,PI3K/CDC42负调控ROCK1/2和E-cadherin的表达。
研究了尼达尼布诱导的内切对细胞侵袭能力的影响。随着治疗时间的延长(8周),细胞数量不断减少,内切、凋亡、坏死等现象频繁发生,直至细胞发生耐药,避免了细胞死亡。培养传代匹配的耐药Pca细胞作为对照,Transwell侵袭实验显示耐尼达尼布的Pca细胞侵袭能力显著提高(P<0.05))。
小鼠Pca异种移植瘤内切
为了进一步研究尼达尼布在前列腺癌细胞内形成中的作用,我们采用皮下注射DU145细胞的方法制备了小鼠异种移植瘤。用尼达尼布治疗的小鼠被观察到,与使用安慰剂的小鼠相比,尼达尼布可以减弱肿瘤的生长。包含IHC表明钙粘蛋白的表达增加在尼达尼布-treated肿瘤与控制,而CDC42表达显著减少尼达尼布-treated肿瘤。这些结果符合体外细胞系,获得的数据显示,尼达尼布可能诱发entosis通过upregulation钙粘蛋白的表达和ROCK1/2信号通路。尼达尼布一盒多少钱?一盒有多少粒呢?一次需要吃几粒?饭前还是饭后吃呢?康安途为您提供详细的购药和用药指导,详情请扫码咨询:
2020-09-29
2020-09-29
2020-09-29
2020-09-29
2020-09-29
2020-09-29
2018-11-15
2017-10-26
2018-11-14
2018-11-16
2018-11-14
2018-11-15