ISG转录中TAF的功能

　　几个因素参与组蛋白H1动力学的调节。高迁移率基团蛋白通过动态竞争染色质结合位点来削弱组蛋白H1与核小体的结合。组蛋白变体H3.3与活性基因表达结合进入核小体染色质中，可抵消组蛋白H1的结合。除这些蛋白质外，模板激活因子-I（TAF，也称为SET）调节组蛋白H1动力学，称为组蛋白伴侣。

　　TAF首先被鉴定为体外腺病毒DNA复制的刺激物，随后的研究表明TAF充当组蛋白H3-H4和接头组蛋白H1的组蛋白伴侣。 TAF与哺乳动物体细胞核中的组蛋白H1相关，并在体外显示组蛋白H1伴侣活性。在这项研究中，我们确定了一种通过组蛋白H1和TAF沉默ISG转录的新机制。在IFN介导的转录沉默状态诱导后的转录早期，TAF-1敲低（KD）促进ISG转录。在TAFKD细胞中，ISG启动子上的转录因子水平在IFN诱导后转录的早期阶段增加，并且ISG启动子上的组蛋白H1的数量从转录沉默状态到早期阶段显着降低。 IFN诱导后的转录。

　　对于ISG转录中的TAF功能，也需要组蛋白H1伴侣活性必不可少的TAF结构域。组蛋白H1 KD和TAF-1 KD一样增加了ISG转录。双TAF和组蛋白H1 KD不会累加影响ISG转录。在TAFKD和组蛋白H1KD中，ISG启动子的微球菌核酸酶（MNase）敏感性均增加。综合这些发现，我们建议TAF通过其组蛋白H1伴侣活性将组蛋白H1募集到ISG启动子上，抑制ISG启动子上转录复合物的形成并在转录沉默状态下限制异常转录.HeLa S3和HEK293细胞生长在Dulbecco改良的必需培养基中添加10％胎牛血清。本研究中使用的抗体如下：抗STAT1α/β，抗STAT2，抗IRF9，抗磷酸（Tyr701）STAT1，抗磷酸（Tyr689）STAT2，抗磷酸（Ser727）STAT1，抗Pol II，抗β-肌动蛋白，抗组蛋白H3（ab1791; Abcam），抗乙酰基组蛋白H3（06-599; Millipore ），抗组蛋白H1.2（ab4086; Abcam），抗Flag（F3165; SIGMA）和抗TAF-Iα/β（单克隆抗体KM1725）抗体.pU6-puro-siTAF- I，pU6-puro-siH1或pU6-puro-siEGFP使用Gene Juice（Novagen），根据制造商的规程使用。转染后16 h，将嘌呤霉素以2μg/ ml的浓度添加到培养基中，并将细胞进一步孵育20-24 h。在存在嘌呤霉素的条件下进行选择后，将细胞转移至不存在嘌呤霉素的培养基中，并进一步孵育48小时。

　　商业上购买了针对TAF和组蛋白H1.2的siRNA。根据制造商的协议，将siRNA与Lipofectamine RNAiMAX（Invitrogen）一起引入HeLa S3细胞。阴性对照Stealth siRNA（12935-200; Invitrogen）被用作阴性对照。在细胞裂解缓冲液中裂解细胞[10-mM Tris-HCl，pH 7.9，300-mM NaCl，1-mM乙二胺四乙酸（EDTA），1％NP-40，10％甘油，5-mMβ-D-甘油磷酸酯，1-mM氟化钠，1-mM原钒酸钠和1-mM苯基甲基磺酰氟（PMSF），并在4°C下恒温旋转30分钟。离心后，将上清液级分在7.5–12.5％的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）上分离，并电吸印到硝酸纤维素膜上。将硝酸纤维素膜与特异性抗体孵育，然后与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗体，生物素化抗兔Ig或生物素化抗小鼠Ig孵育。链霉亲和素碱性磷酸酶或链霉亲和素-辣根过氧化物酶用于检测生物素化的Ig。现在taf哪能买到？价格是多少？详情可咨询下方微信。