TFV和TAF的细胞摄取是否也显示极性

　　认识到细胞完整性至关重要，我们在添加TFV之前和添加之后测量了跨上皮抵抗性（TER），并在培养中进行了3天的顶端和基底外侧冲洗。每天测量TER时，TFV处理对TER没有明显影响，表明在整个实验过程中都保持了细胞和屏障的完整性。同时，我们测量了ARVs对紧密连接基因表达的影响，发现TFV对极化上皮细胞中的TJP1，OCLD，CLDN2和CLDN4mRNA表达没有影响。作为细胞活力的进一步指标，在单独的研究中，极化的EM上皮细胞用TFV（3277μM）和TAF（10μM）预处理24hr，然后以24hr的间隔测量3天的活力。两个ARV均未发现生存力变化。这些数据表明，在我们的研究中，在基底外侧隔室中发现的保护性抗逆转录病毒水平不是由于上皮损伤引起的抗逆转录病毒渗漏。

　　认识到预载后的ARVs优先从基底外侧释放，我们研究了TFV和TAF的细胞摄取是否也显示极性。我们发现TFV和/或TAF的定向应用（根尖与基底外侧）会影响上皮细胞内TFV-DP的浓度。在孵育24小时后进行测量时，与TFV顶端孵育的匹配细胞相比，与TFV基底外侧孵育的上皮细胞的TFV-DP含量高出2-3倍。相反，将TAF应用于极化上皮细胞的顶表面或基底外侧表面，可得到相当的TFV-DP细胞内浓度。

　　总体而言，这些发现表明，预载有TFV或TAF的上皮细胞逐渐向基底外侧释放ARV，从而赋予CD4 + T细胞部分组织保护力，这种保护作用可持续数天。ARVs释放模式是子宫内膜上皮细胞特有的可能性促使我们问，FRT中其他部位的上皮细胞是否可能共享相似的ARV释放模式。纯化的宫颈管（CX）和宫颈管（ECX）上皮细胞生长至汇合，与TFV或TAF孵育24小时，然后洗涤以去除多余的ARV，然后收集CM 24小时。当细胞预装有TFV或TAF时，来自CX和ECX的基底外侧CM上皮细胞可以抵抗CD4+T细胞的HIV感染。重要的是，类似于EM上皮细胞，来自CX和ECX细胞的顶端CM对HIV感染没有保护作用。在其他研究中，我们发现以24小时间隔收集的基底外侧分泌物也可以抵抗HIV感染，类似于EM上皮细胞所见。因此，EM，CX和ECX上皮细胞共有TFV和TAF衍生的释放模式，这种释放是逐渐的，主要是向基底基质的基底外侧释放。

　　我们以前的研究表明，除上皮细胞外，FRT的基质成纤维细胞还浓缩细胞内TFV-DP，其含量比FRTCD4+T细胞高约10倍24。为了确定EM，CX和ECX的成纤维细胞分泌是否能够保护CD4 + T细胞免受HIV感染，将生长至融合的24孔板中的成纤维细胞与TFV（3277μM）或TAF（10μμM）孵育24 hr。重复洗涤后，在收集CM进行分析之前，将细胞在新鲜培养基中再培养24小时。如图4a，b所示，来自EM的CM以及预装有TFV和TAF的CX和ECX成纤维细胞能够部分保护活化的CD4+T细胞免受HIV感染（30-50％的保护）。那么taf哪能买到？价格是多少？需要购买可添加下方微信。