TAF治疗效果后各自基线序列进行比较结果

　　在第96周进行耐药性监测。在任何病毒血症患者的第96周（HBV DNA≥69 IU / ml）或在早期停药至少24周或以上时，都尝试对血清样本进行HBV Pol / RT测序。由于分析的局限性，HBV DNA水平<69 IU / ml的样品未包含在测序分析中。使用自动MagNA Pure System从200μl患者血清中分离DNA。使用扩展高保真PCR系统（Roche）扩增HBV Pol / RT结构域（氨基酸1至344）。在使用Quant-iT PicoGreen dsDNA试剂盒（Life Technologies，Carlsbad，CA）进行定量之前，先使用Ampure XP珠（Beckman Coulter，Brea，CA）纯化扩增的PCR产物。

　　对于HBV DNA≤159 IU / ml的患者，使用ABI BigDye Terminator v3.1循环测序试剂盒（Thermo Fisher Scientific，马萨诸塞州沃尔瑟姆）进行人群双脱氧测序。对于HBV DNA水平> 159 IU / ml的患者，使用Illumina-MiSeq平台（150个碱基的双末端读数； Illumina，Inc，圣地亚哥，加利福尼亚）对PCR产物进行深度测序。对患者基线样本进行深度或群体测序。使用MOSAIK（美国波士顿学院），将基线共有序列用于比对相应基线后样品的原始读数。对于具有深度测序数据的样品，使用VICUNA组装原始读数以创建组装序列，然后与组装序列进行比对。

　　分析氨基酸取代的突变频率截止值为15％，并与每个患者的各自基线序列进行比较。所有扩增和测序步骤均在DDL Diagnostic Laboratories（荷兰赖斯韦克）进行。基线时氨基酸混合物到相应的基线后序列中完全调用氨基酸的分辨率不包括在基线中。先前已经描述了多态性和保守氨基酸。保守位点定义为观察到的具有> 99％的具有一个氨基酸或具有两个氨基酸而具有一个氨基酸的位点。所有其他位置被分类为多态的。

　　对于任何病毒学突破且无依从性证据的患者和检测到保守位点置换的患者，评估其对TAF或替诺福韦的体外敏感性。病毒学突破定义为在最低点HBV DNA低于<69 IU / ml或HBV DNA升高≥1.0-log10后，确认HBV DNA≥≥69 IU / ml。如先前所述进行表型分析，并作一些修改。简而言之，将用于测序的HBV Pol / RT PCR产物连接到表达缺乏RT区域的完整基因型A HBV基因组的质粒载体（pRTAN）中。将重组质粒瞬时转染到HepG2细胞中，并使用QuantiGene 2.0分支DNA技术和HBV特异性探针（Affymetrix，Santa Clara，CA）测量上清液中的HBV DNA。

　　关于测定参考计算EC 50。 EC50的倍数变化是通过比较基准样品的倍数变化与治疗中样品的倍数变化来确定的。测量了TAF组患者对TAF的敏感性。对于TDF组的患者，由于存在血清酯酶，因此TDF在细胞培养基中不稳定，因此评估了对替诺福韦的敏感性。野生型实验室病毒（pHY92）和抗ADV的病毒（rtA181V + rtN236T）分别用作敏感性和抗性的对照。

　　如先前所述，通过使用液相色谱/质谱法测定血浆中的替诺福韦水平来测量对研究药物的粘附性。不粘连的定义是替诺福韦水平低于定量限或替诺福韦谷水平低于平均水平10倍以上，TDF为300 mg每天一次（<1 ng / ml）。如此看来TAF的作用是好过于TDF的，所以比较推荐购买，taf哪能买到？价格是多少？详情可咨询下方问题。