泰菲乐/达拉非尼对V600D/R突变的黑色素瘤细胞的影响

　　常规治疗剂对恶性黑色素瘤的治疗在很大程度上不能令人满意。最近，从临床角度来看，一种基于突变 BRAF 基因（代表黑色素瘤患者最普遍的改变）抑制剂的创新方法似乎非常有希望。在这方面，一种新化合物达拉非尼（商品名：泰菲乐）已被证明对携带 BRAFV600E/K 突变的患者有效。我们在这里测试了泰菲乐/达拉非尼抑制原发性黑色素瘤细胞系细胞生长的能力，这些细胞系由患者的肿瘤组织建立并携带 BRAFV600D/R 突变。

　　方法

　　测试了三种黑色素瘤细胞系：M257 野生型 BRAF、LCP BRAFV600R 和 WM266 BRAFV600D。使用标准化方法进行 MTT 测定。为了评估 MAPK 通路的抑制作用和随之而来的细胞增殖抑制作用，通过对用泰菲乐/达拉非尼处理后的细胞系总蛋白提取物进行的蛋白质印迹分析检测 ERK 的磷酸化。

　　结果

　　我们的实验证明了泰菲乐/达拉非尼的有效作用和对携带 BRAFV600D/R 突变的黑色素瘤细胞系中 MAPK 途径的抑制。

　　结论

　　这些结果可能有助于扩大黑色素瘤患者的数量，这些患者可能受益于更有效的靶向治疗。

　　丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK) 通路是细胞周期进程的关键调节因子，通常通过RAS、RAF和MEK基因的体细胞致癌突变在人类肿瘤中被激活。

　　在黑色素瘤中，MAPK 通路中最常见的突变成分是BRAF基因。其中，最普遍的BRAF突变（几乎 90% 的病例）表现为 600 位谷氨酸取代缬氨酸（V600E）。这种氨基酸变化导致 BRAF 的致癌激活，其激酶活性增加，随后诱导下游 ERK 蛋白的磷酸化。组成型激活的 ERK 然后刺激细胞增殖和存活，维持肿瘤的维持和生长。剩余的BRAF突变主要以其他 V600 亚型（V600K、V600D 和 V600R）为代表，约占致病基因序列变异的 8% 。根据我们的经验， 43% 的原发性黑色素瘤和 48% 的转移性黑色素瘤发生BRAF基因突变。

　　最近两种选择性抑制剂在黑色素瘤治疗中取得了显着益处：vemurafenib (PLX4032)，它似乎特别作用于 BRAFV600E突变体（尽管它已被证明也抑制表达其他密码子 600 BRAF 突变的黑色素瘤细胞系的增殖： V600D、V600K 和 V600R)和泰菲乐/达拉非尼，已被证明主要抑制 BRAFV600E/K突变体中的激酶活性。

　　为了研究后一种化合物是否可能对更广泛的 BRAF 突变体发挥抑制作用（类似于先前报道的 vemurafenib/PLX4720），携带两种最常见的BRAF突变（V600D 和 V600R）的黑色素瘤细胞系在这里用达拉非尼治疗，然后评估细胞增殖。

　　使用一组源自切除的原发性和转移性肿瘤的黑色素瘤细胞系，我们研究了泰菲乐/达拉非尼对培养的黑色素瘤细胞发挥抗增殖活性和阻断突变 BRAF 诱导的 ERK 信号传导的能力。在我们的检测中，LCP 黑色素瘤细胞系携带 BRAFV600R突变，而 WM266 黑色素瘤细胞系则呈现 BRAFV600D变体;具有野生型BRAF的 M257 黑色素瘤细胞系用作对照。

　　在我们的系列中，泰菲乐/达拉非尼在两种携带突变BRAF（无论突变类型，BRAFV600D或 BRAFV600R）的黑色素瘤细胞系中均显示出显着的细胞增殖抑制作用，而在呈现野生型的对照细胞中缺乏显着的抗增殖作用BRAF。关于对 ERK 信号的干扰，与具有野生型BRAF的对照细胞相比，具有 BRAFV600D/R突变的细胞系对磷酸化 ERK 的抑制作用更快更强。

　　据报道，泰菲乐/达拉非尼对 BRAFV600E/K突变体具有特异性；这里提供的数据强烈表明 BRAFV600D/R突变也可能被包括作为药物的有效靶点。尽管如此，尽管 BRAFV600D/R突变仅占BRAF基因整个致癌变异集的一小部分，但从实践的角度来看，一种对更广泛的 BRAF 突变靶标显示有效的药物的可用性可能会有所帮助，允许临床医生扩大可能受益于更有效的靶向治疗的黑色素瘤患者的子集。

　　尽管在有限的一系列黑色素瘤细胞系上进行，但我们的研究提供了证据，表明泰菲乐/达拉非尼可能对BRAF的致癌变体发挥更广泛的抑制活性。

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