舒尼替尼Sunitinib抑制RFA诱导的PD-1和PD-L1上调情况

　　我们之前证明，肿瘤驱动的 PD-1 上调与 HCC 环境中效应 CD8+T 细胞的耗竭有关。因此，我们研究了舒尼替尼（Sunitinib）是否允许 RFA 原位释放抗原通过抑制 PD-1 表达来激活抗 HCC 免疫反应。在这方面，我们从接受单药治疗或舒尼替尼和 RFA 联合治疗的小鼠中分离出 TIL。

　　出乎意料的是，RFA 治疗导致肿瘤浸润性 CD8+中 PD-1 表达的额外增加和 CD4+T 细胞。这种 PD-1+CD8+T 细胞和 PD-1+CD4+T 细胞比例的增加被舒尼替尼治疗显着抑制。在接受不同治疗的小鼠的脾细胞中也检测到了类似的效果。舒尼替尼介导的 PD-1 表达抑制可以解释为什么联合治疗能够使 RFA 释放的原位抗原在 HCC 的情况下激活抗肿瘤免疫反应。一致地，qPCR 检测表明，与未治疗的对照小鼠相比，RFA 进一步增加了肿瘤中 PD-1 和 PD-L1 的 mRNA 表达，而舒尼替尼治疗显着抑制了这种增加，从而显着降低了 PD- 1 和 PD-L1 在联合治疗的小鼠中比在单一 RFA 治疗的小鼠中。这些结果表明，舒尼替尼治疗可抑制 RFA 诱导的 PD-1 和 PD-L1 的额外上调，从而激活效应 CD4+和 CD8+T 细胞。

　　与临床发现相似，RFA 治疗导致 HCC 小鼠中 PD-1 和 PD-L1 上调。为了阐明舒尼替尼给药如何抑制 RFA 治疗的荷瘤小鼠的 PD-1 表达，我们检测了与肿瘤诱导的免疫抑制相关的不同信号分子的表达。,qPCR 检测到 RFA 治疗小鼠肿瘤中 HGF、c-Met、HIF-1α 和 IL-6 的 mRNA 表达增加；舒尼替尼给药有效地抑制了这种增加。蛋白质印迹检测到 HGF 在蛋白质水平上的相似表达模式。这些结果表明HGF与肿瘤生长和舒尼替尼治疗密切相关。

　　为了检查 HGF 是否是促成舒尼替尼介导的 PD-1 表达抑制的关键因素，将在野生型小鼠中制备的脾细胞以 1 μg/mL 的剂量接种在抗 CD3 Abs 涂层板中，然后用肿瘤刺激从四组小鼠中提取的裂解物。72 小时后，收集细胞并用流式细胞仪进行分析。结果表明，来自 RFA 处理的肿瘤的裂解物显着增加了 CD4+和 CD8+T 细胞中 PD-1 的表达，并且这种增加被添加抗 HGF 抗体 (iHGF) 中和。相比之下，来自联合治疗的小鼠的裂解物未能促进 CD4+中的 PD-1 表达。

　　和 CD8+T 细胞，但添加重组 HGF (rHGF) 恢复了这种效果。这些结果表明，HGF 是肿瘤诱导的 PD-1 上调和舒尼替尼介导的HCC 小鼠效应 CD4+和 CD8+ T 细胞中 PD-1 抑制的关键因素。更多舒尼替尼详情可咨询下方微信。