舒尼替尼Sunitinib与RFA协同改善HCC环境中的抗HCC免疫反应

　　舒尼替尼（Sunitinib）具有显着提高 RFA 治疗效果的能力。我们之前已经证明 RFA 导致细胞凋亡性肿瘤死亡并且肿瘤诱导的免疫耐受被舒尼替尼抑制。因此，我们假设联合治疗的疗效提高归因于免疫激活。为了验证这一假设，我们首先评估了每只小鼠肝内免疫的变化。RFA治疗两周后，对各组小鼠实施安乐死，分离脾细胞和肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）。流式细胞仪检测到肿瘤浸润 CD8+的频率显着增加接受联合治疗的小鼠中的 T 细胞与未接受治疗或接受每种单一治疗的对照小鼠相比。

　　相应地，检测到 CD8 +T 细胞的绝对数量明显增加，而不是 CD4+T 细胞，检测到。这种增加通过肿瘤组织切片中 CD8 的 IHC 染色得到证实并且也在脾细胞中观察到。作为对联合治疗的反应，我们还检测到与未经治疗或接受每种单一疗法的对照小鼠相比，脾细胞中记忆 CD8+T 细胞 (CD44+CD62L- ) 的频率显着增加。相比之下，我们观察到与未经治疗或 RFA 单药治疗的对照小鼠相比，联合治疗显着降低了肿瘤浸润 FoxP3+ Tregs 的频率。此外，在脾细胞中观察到轻微的影响。此外，与每种单一疗法相比，发现联合治疗可显着增加肿瘤浸润性 DC（CD11b+CD11c+）的频率。这些数据表明，舒尼替尼和RFA的组合能够激活免疫反应，这与TME中效应CD8+T细胞和DCs的增加以及免疫抑制性Tregs的减少有关。

　　RFA 诱导的原位肿瘤细胞凋亡为诱导抗肿瘤免疫创造了抗原来源。在我们独特的小鼠 HCC 模型中，TAg 被肿瘤特异性表达为可追踪的 TSA，这使我们能够研究小鼠对不同治疗的 TSA 免疫力。小鼠被随机暴露于每种单一疗法或联合疗法。RFA 后两周，在每只小鼠中分离 TIL，并用 TSA 表位（包括 TAg 表位 I 和 IV）进行体外刺激。流感表位肽用作非特异性对照。刺激后 5 小时，流式细胞术测定在联合治疗的小鼠中检测到 3% 的产生 IFN-γ 的 CD8+ TIL。

　　这一比例明显高于未经治疗的对照小鼠 (1%)、SU 治疗的小鼠 (1.5%) 和 RFA 治疗的小鼠 (1.5%) 中产生 IFN-γ 的 CD8+ TILs 细胞。在脾细胞中也观察到了这种增加，但不如在 TIL 中那么多。同样，TIL 中产生 TNF-α 的 CD8+T 细胞的频率显着增加（2.46%）和脾细胞（1.3%）在联合治疗的小鼠中检测到。此外，ELISA 检测到血清 IFN-γ 的产生增加, TNF-α 和白细胞介素 2 (IL-2) 在联合治疗的小鼠中。这种增加也反映在 qPCR 检测到的 mRNA 水平上。这些结果表明，舒尼替尼治疗使 RFA 释放的原位抗原能够激活 TSA 免疫反应。更多详情可咨询下方微信。