克唑替尼(Xalkori)与化疗药物有协同作用

　　ALK畸变的存在与高危神经母细胞瘤患者的较差生存率相关。克唑替尼（Xalkori）等 ALK 抑制剂的出现提供了新的治疗机会。然而，某些ALK突变导致新的克唑替尼耐药，克唑替尼的 I 期试验显示，携带这些ALK突变的患者缺乏反应。因此，了解耐药机制并为临床定义规避策略至关重要。

　　检测了具有不同ALK状态的人神经母细胞瘤来源的细胞系、细胞系来源和患者来源的异种移植物 (PDX) 模型对克唑替尼（Xalkori）联合拓扑替康和环磷酰胺 (topo/cyclo) 的敏感性。评估了培养的细胞和异种移植物对这些药物对增殖、信号传导和细胞死亡的影响，并评估了协同作用。

　　结果

　　在具有最常见ALK突变的神经母细胞瘤小鼠异种移植物中，包括与克唑替尼耐药相关的那些突变（但在野生型ALK中不存在），克唑替尼联合拓扑/环增强肿瘤反应和小鼠无事件生存。在具有ALK畸变（突变或扩增）的神经母细胞瘤细胞系中，克唑替尼 + 拓扑/环比单独使用克唑替尼或拓扑/环显示出协同细胞毒性和更高的半胱天冬酶依赖性细胞凋亡。

　　结论

　　将克唑替尼（Xalkori）与常用于治疗新诊断的高危神经母细胞瘤患者的化疗药物联合使用可恢复具有敏感ALK畸变和新发耐药ALK突变的临床前模型的敏感性。这些数据支持克唑替尼和常规化疗的临床测试，目标是将 ALK 抑制整合到ALK异常神经母细胞瘤患者的多药治疗中。

　　尽管在放化疗、手术和免疫治疗领域取得了进展，但神经母细胞瘤仍然是儿童癌症死亡的主要原因。优化这些患者的治疗变得越来越复杂，需要一种方法来确定何时最好结合靶向药物，以及与哪些化学疗法结合靶向药物，以及在哪些患者中。靶向疗法开发的快速进展为治疗利用致癌驱动因素提供了前所未有的能力。ALK是神经母细胞瘤中易于处理的分子靶点，该基因的异常占遗传病例的 80% 以上，并且存在于 14% 的高危病例中。我们之前报道了神经母细胞瘤中最常见的ALK激酶结构域突变的敏感性差异，这表明 ALK 抑制剂作为单一药物可能在此类患者中失败。然而，ALK 抑制剂仍有可能在携带ALK突变的肿瘤中增强传统的细胞毒剂，从而赋予单药 ALK 抑制剂抗性。

　　在这里，我们报告了 ALK 抑制剂克唑替尼（Xalkori）与常规化疗药物（拓扑替康加环磷酰胺）的新型治疗组合，在克唑替尼敏感和克唑替尼耐药的ALK模型中具有显着的抗肿瘤活性并显着延长无事件生存期-突变神经母细胞瘤。我们还展示了体外的证据与这种组合在一种具有高水平 ALK 扩增的神经母细胞瘤细胞系中的协同作用。虽然我们的数据表明 ALK 扩增的肿瘤将对克唑替尼联合拓扑替康和环磷酰胺有反应，但在代表这种罕见的具有 ALK 畸变的神经母细胞瘤子集的模型中需要进行额外的非临床研究。重要的是，在单独使用克唑替尼或化疗仅诱导轻度或无活性的情况下，可以看到联合用药的协同作用。例如，具有抗性 F1174L 突变的异种移植物在停止治疗后的 24 周内显示肿瘤完全缓解。有趣的是，这种持续的抗肿瘤活性伴随着肿瘤抑制蛋白 p53 及其下游效应物 p21、PUMA 和 cleaved-caspase 3 的显着上调。用联合疗法治疗的ALK异常和 p53 功能性神经母细胞瘤模型。这一观察结果促使我们研究 p53 通路的激活是否可能是克唑替尼和遗传毒性药物联合使用时观察到的协同作用的决定因素。携带突变TP53的神经母细胞瘤模型对联合治疗缺乏反应提供了初步证据，表明这种协同作用至少部分依赖于功能性 p53 途径。此外，在两个ALK突变的神经母细胞瘤细胞与基因消融的 p53，我们发现与各自的对照系相比，联合治疗后协同作用的消除。总之，我们在此表明 p53 通路的激活在介导克唑替尼和化学疗法之间在激活ALK的神经母细胞瘤模型中观察到的协同作用中发挥作用。

　　总而言之，我们证明了克唑替尼（Xalkori）与常规化疗药物联合使用在 ALK 驱动的神经母细胞瘤模型中是有效的，这些模型显示出不同的克唑替尼敏感性，为目前正在进行的 COG 1 期试验提供了基本原理。在新诊断的神经母细胞瘤患者的高风险亚组中，14% 的患者会出现ALK异常并且结果较差，这为测试克唑替尼与这些患者当代化疗方案的骨干整合的临床研究提供了独特的机会。携带野生型ALK和/或功能丧失TP53突变的神经母细胞瘤模型缺乏协同作用，支持了ALK的应答假设除了功能性 p53 途径之外，状态是对该治疗策略反应的决定因素。克唑替尼（Xalkori）和其他 ALK 抑制剂与 DNA 损伤性化疗组合的系统研究正在进行中，以严格评估这些方案的时间和顺序的重要性，以便最好地指导临床试验设计。

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