米哚妥林/雷德帕斯可增强利妥昔单抗的抗肿瘤活性

　　短期强化化疗方案大大延长了伯基特淋巴瘤 (BL) 患者的总生存期，并通过添加利妥昔单抗进一步改善了这一点。然而，利妥昔单抗耐药性的不可避免的发展和化疗的毒性仍然是障碍。我们首先制备了两种对利妥昔单抗介导的 CDC 具有抗性的 BL 细胞系。使用磷酸化抗体微阵列，我们发现 PI3K/AKT 通路包含最多的磷酸化蛋白质/命中，而可能受 PKC 调节的凋亡通路在抗性细胞中显示出最大的倍数富集。PI3K/AKT 抑制剂 IPI-145 未能逆转耐药性。相比之下，泛 PKC 抑制剂米哚妥林（雷德帕斯）单独或与利妥昔单抗联合在原始细胞和耐药细胞中均表现出有效的抗肿瘤活性。尤其，米哚妥林通过降低 PKC 的磷酸化以及下游 Bad、Bcl-2 和 NF-κB 的磷酸化来促进细胞凋亡。因此，米哚妥林通过补充促凋亡作用提高了利妥昔单抗的活性。在体内，与单独使用利妥昔单抗相比，单独使用米哚妥林可有效延长携带抗性 BL 细胞的小鼠的存活率。与利妥昔单抗相比，在利妥昔单抗中加入米哚妥林可显着提高生存率，但与米哚妥林单药治疗相比没有。我们的研究结果呼吁进一步评估单独或与利妥昔单抗联合使用米哚妥林治疗耐药性 BL。与单独使用利妥昔单抗相比，单独使用米哚妥林可有效延长携带抗性BL 细胞的小鼠的存活率。与利妥昔单抗相比，在利妥昔单抗中加入米哚妥林可显着提高生存率，但与米哚妥林单药治疗相比没有。我们的研究结果呼吁进一步评估单独或与利妥昔单抗联合使用米哚妥林治疗耐药性 BL。与单独使用利妥昔单抗相比，单独使用米哚妥林可有效延长携带抗性BL 细胞的小鼠的存活率。与利妥昔单抗相比，在利妥昔单抗中加入米哚妥林可显着提高生存率，但与米哚妥林单药治疗相比没有。我们的研究结果呼吁进一步评估单独或与利妥昔单抗联合使用米哚妥林治疗耐药性 BL。

　　在本研究中，我们发现 PKC 在利妥昔单抗抗性 BL 细胞中高度上调和激活。单独或与利妥昔单抗联合使用泛 PKC 抑制剂米哚妥林可有效引发细胞凋亡并显着改善 OS，尤其是在耐药 BL 细胞中。尽管 PKC 在癌症发展中的功能仍然存在争议，但 PKC 抑制剂在临床试验中被广泛测试用于治疗多种类型的癌症。2017 年 4 月，米哚妥林获批用于治疗 FLT3 突变和晚期 SM 的 AML 。目前，尽管有少量研究报告了 BL 细胞中 PKC 激活的重要性，但没有在 Clinicaltrials.gov 注册 BL 治疗的临床试验。因此，我们的研究结果表明，必须单独或与利妥昔单抗联合进行米哚妥林的临床试验，优选用于复发/难治性 BL 患者，也可能用于其他复发/难治性高激活 PKC 的 NHL 患者。

　　利妥昔单抗在治疗多种 B 细胞淋巴瘤方面取得了巨大成功。利妥昔单抗可能破坏CD20表达主要通过ADCC和CDC的淋巴细胞通过在膜结合CD20。然而，对利妥昔单抗的耐药性仍然是复发/难治患者的主要挑战。患者大约50％是不响应利妥昔单抗治疗，尽管CD20的表达，并且最初响应的患者最终发展到利妥昔单抗进一步治疗的抗性。可能无法克服对 ADCC 的耐药性，因为这种耐药性可能是由患者的内在免疫特征引起的。因此，当前的方法主要集中于提高利妥昔单抗介导的CDC的功效，包括上调使用组蛋白CD20的表达脱乙酰酶抑制剂曲古菌素A或合成的CpG寡脱氧核苷酸和用改进的单克隆抗体抑制CD59功能或细菌毒素来源的 ILYd4。然而，在实验系统中观察到的这些影响需要进一步仔细研究，包括对其毒性的评估。

　　尽管利妥昔单抗对淋巴细胞的直接细胞毒性作用有些争议，但对各种 NHL 细胞的大量研究表明，利妥昔单抗缺乏促凋亡能力。已经实施了一些策略，通过与其他药物联合来增加促凋亡作用来提高利妥昔单抗治疗的敏感性。这些额外的试剂包括大分子如人源化单克隆马帕木单抗靶向TRAIL-R1，所述遗传改造的融合蛋白scFvRit：sFasL的，APO2配体（的Apo2L）/ TRAIL（dulanermin）和抗CD20-白介素-21，和小分子，例如选择性 NEDD8 激活酶抑制剂 Pevonedistat (MLN4924)，mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶点）抑制剂替西罗莫司和蛋白酶体抑制剂硼替佐米。然而，这些药物的功效需要进一步确认，或者根据临床试验被认为是不够的。有趣的是，obinutuzumab (GA101) 是一种新型 II 型乙二醇工程人源化单克隆抗 CD20 IgG1 抗体，与利妥昔单抗相比，其对 CLL（慢性淋巴细胞白血病）和复发/难治性惰性 NHL 的疗效优于利妥昔单抗，这是由于诱导直接细胞死亡和 ADCC 的能力，但在介导 CDC 方面效力较低。此外，在利妥昔单抗敏感/耐药的 BL中也观察到了 obinutuzumab 与利妥昔单抗相似的优越疗效。尽管 obinutuzumab 能够诱导强烈直接细胞死亡的潜在机制在很大程度上仍不清楚，但已经怀疑几种介质包括活性氧、BCR（B 细胞抗原受体）或细胞毒性途径。因此，在obinutuzumab中加入米哚妥林是否能增强抗肿瘤活性值得进一步研究。在此，我们报道了米杜林通过抑制 BL 细胞中的 PKC 促进细胞凋亡，从而强烈增强了利妥昔单抗的活性。

　　米哚妥林（雷德帕斯）由星形孢菌素修饰，以提高对 PKC 的选择性，然后进一步发现它可以抑制其他激酶，如 FLT3、PDGFR、KIT 和 VEGFR2，以及midostaurin 代谢物。在 I 期临床试验中，米哚妥林作为慢性口服疗法被发现是安全且可耐受的并根据其有效性获得 FDA（食品和药物管理局）的批准。考虑到 PKC 在抗性 BL 细胞中高度磷酸化，我们测试了米哚妥林在原始和抗性 BL 细胞中增强利妥昔单抗抗肿瘤活性的体外和体内作用。我们发现，米哚妥林通过促进细胞凋亡，可能是通过改变下游信号分子（包括 Bad、Bcl-2 和 NF-κB）的磷酸化，强烈增强了利妥昔单抗的细胞毒性，尤其是在抗性 BL 细胞中。我们的研究结果支持在复发/难治性 BL 患者中单独或联合利妥昔单抗以及联合或不联合短期强化化疗的临床试验中的进一步评估。微信扫描下方二维码了解更多：